Im Alter von 20 Jahren wurde Diana Amft, nachdem sie vorher zwölf Absagen bekommen hatte, an der Münchner Schauspielschule Zerboni aufgenommen. Es folgten Theaterauftritte und 1999 erste Rollen in Fernsehproduktionen. Diana Amft wurde durch die Rolle der Inken in dem Teenie-Komödie Mädchen, Mädchen (2001) und dessen Fortsetzung Mädchen, Mädchen 2 – Loft oder Liebe (2004) bekannt. Für den Soundtrack letzteren Films sang sie mit der Girlgroup Tears den Titel Funky Freakshow ein. Von 2008 bis 2011 war sie an der Seite von Florian David Fitz in der Hauptrolle als Dr. Margarete „Gretchen“ Haase in der mehrfach ausgezeichneten Fernsehserie Doctor’s Diary zu sehen. 2013 übernahm sie die Hauptrolle einer geschiedenen Mittdreißigerin mit Kind in der RTL-Sitcom Christine. Perfekt war gestern!, einer Adaption der amerikanischen Serie The New Adventures of Old Christine. Ebenfalls 2013 spielte und sang sie die Ottilie Giesecke in der Neuverfilmung des Singspiels von Ralph Benatzky Im weißen Rössl – Wehe Du singst! Als Vorlage diente das gleichnamige Alt-Berliner Lustspiel von Oskar Blumenthal und Gustav Kadelburg, das bereits mehrfach verfilmt worden war. Im Jahr 2017 warb sie für den Schokoriegel Yogurette.